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文章摘要
Bacillus altitudinis SYBC hb4碱性β-葡萄糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质的研究
Cloning,Experssion and Characterization of Alkali-Stable β-Glucosidase from Bacillus altitudinis SYBC hb4
  
DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2017.11.012
中文关键词: 碱性β-葡萄糖苷酶  大肠杆菌  基因克隆  酶学性质  高地芽孢杆菌
英文关键词: alkali-stable β-glucosidase,Escherichia coli,clone,characterization,Bacillus altitudinis SYBC hb4
基金项目:
作者单位
刘群 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院江苏 无锡214122 
管政兵 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院江苏 无锡214122 
蔡宇杰 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院江苏 无锡214122 
廖祥儒 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院江苏 无锡214122 
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中文摘要:
      为获得耐碱性β-葡萄糖苷酶,进一步研究碱性β-葡萄糖苷酶的酶学性质。从实验室已有蜂蜜中筛选出一株耐碱性的高地芽孢杆菌Bacillus altitudinis SYBC hb4,根据Bacillus altitudinis SYBC hb4中β-葡萄糖苷酶(bglA)基因序列设计一对引物,通过PCR扩增技术,获得β-葡萄糖苷酶基因(bglA),将扩增后的bglA与质粒pColdII构建重组表达载体pColdII-bglA,并转化至大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中表达。重组表达的β-葡萄糖苷酶酶活可达12.40 U/mL;该重组β-葡萄糖苷酶最适反应温度为60 ℃;最适反应pH值为pH 8.0;5 mmol/L的Mg2+可使酶活提高50%左右。本实验所获得的碱性β-葡萄糖苷酶比已报道的重组酶在碱性条件下稳定性更好。
英文摘要:
      In order to obtain alkali-stable β-glucosidase and study its enzyme characterization,an alkali-stable strain Bacillus altitudinis SYBC hb4 was screened and isolated from native honey. Based on the β-glucosidasecoding sequences from Bacillus altitudinis SYBC hb4,design up and downstream oligonucleotide primers were designed,and the target gene(bglA) was amplified by using PCR.The expression vector pColdII-bglA was constructed by subcloning the target gene into plasmid pColdII,and then transformed into E. coli BL21(DE3)for heterogeneous expression.The expression β-glucosidase acticity reached to 12.40 U/mL. The optimum temperature and pH of the recombinant β-glucosidase were 60 ℃ and 8.0,respectively. And 5mmol/L Mg2+ could increased 50% β-glucosidase activity.
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